## 甘油检测概述

甘油是甘油三酯水解产生的重要产物，其含量与游离脂肪酸相似，是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，但检测过程更加简便。尊龙凯时推出的试剂盒经过优化，能够有效检测实体组织和细胞中的甘油含量，其线性范围为10-1200µmol/L。

## 检测原理

在ATP存在的条件下，甘油通过甘油激酶被磷酸化为3-磷酸甘油，随后被甘油磷酸氧化酶氧化生成过氧化氢。在过氧化物酶的催化下，生色底物转化为苯kun亚胺，其光密度值与甘油浓度呈正比关系。

## 应用范围

本试剂盒适用于检测实体组织和细胞中的甘油浓度。

## 试剂盒组成

每份试剂盒可以进行105次微板测定或30次1ml比色杯测定，组成如下：

(1) 裂解液 50ml
(2) R1试剂 16ml
(3) R2试剂 4ml
(4) 4mmol/L 甘油标准品 1ml（保持在4ºC可保存6个月）

## 所需设备

本检测需配备酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计，最佳工作波长为550nm。如无此波长，建议优先选用570nm，其次为530nm或490nm。

## 组织和细胞样品处理

对于组织和细胞裂解，其中包括分化的脂肪细胞，需遵循以下步骤：

1. 在消化和离心后收集细胞，或直接在培养皿内进行裂解。常规6孔板每孔约有2x10⁶个细胞，75cm²瓶约有1x10⁷个细胞。根据比例，每1~2x10⁶细胞添加0.1ml裂解液，震荡或涡旋处理后静置10分钟。

2. 动物组织需在新鲜切割并称重后保存，避免冻存-解冻引起的测量误差。称量后，可以通过减量称重法计算出组织重量（约100mg）。建议每1mg组织添加10µl裂解液，以降低样品间蛋白和脂质含量的变异。

3. 组织破碎时推荐使用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器，不建议超声处理以防不完全及不均匀的破碎。

## 裂解液处理

1. 将适量上清液转移至15ml离心管中进行后续操作，余下裂解液可用于BCA法蛋白定量或储存于-20ºC。

2. 在70ºC加热10分钟以灭活脂肪酶，可能会出现絮状沉淀。

3. 在室温下以5000rpm离心5分钟，上层清液即可用于酶学测定。

## 工作溶液制备

按4:1比例，取4ml试剂R1与1ml试剂R2混合，即可立即使用或在4ºC保存不足1天，若变色则需弃去。注意避免可能的甘油污染。

## 标准品稀释

使用蒸馏水、生理盐水或与样品相同的缓冲液将4mM甘油标准品梯度稀释至1000、500、250、125、625、3125、15625及78125µmol/L，通常取4~6管进行实验，并设置0浓度的对照反应管。

## 甘油测定步骤

1. 按照反应表格添加待测样品，样品体积为10µl，过量可能抑制反应。反应应在237ºC或25ºC条件下进行10分钟，待反应平衡后，颜色在60分钟内保持稳定。

2. 先用蒸馏水与工作液的空白管进行调零，然后测定各管的OD值。

3. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。通过Excel作图步骤，将各标准管OD值作为y轴，标准品浓度作为x轴。具体步骤包括选中数据创建散点图，添加趋势线并显示公式和R²值。

4. 最后，以每mg蛋白浓度或细胞数校正甘油含量，以确保测定结果的准确性。

利用尊龙凯时的甘油检测试剂盒，能够精确、便捷地进行甘油含量的测定，是生物医疗研究中不可或缺的工具。