菌种保藏（culture preservation，culture collection）是保持微生物株活力和遗传特点的重要技术，特别是在生物医学研究中。在基因编辑或改造后的菌种中，这些珍贵且数量有限的菌株需要进行妥善的保藏，以便后续的研究。以下是详细的操作步骤：

菌种保藏步骤

将待保存的菌液与已配好的甘油混合液以1:1的比例混合，最终确保甘油浓度达到20%。为此，需配置40%（v/v）甘油灭菌水混合液。接下来的步骤如下：

1. 取用2ml的离心管或保菌管，并加入500微升的40%甘油-水混合液。
2. 使用移液枪吸取500微升的菌液，确保枪头深入液面以下缓慢加入。
3. 将离心管或保菌管放置于-80℃冰箱中进行保存。

在保菌管上应清晰标注日期、菌种及抗性信息，以便后续的识别和管理。

菌液复苏操作

复苏保存的菌液是进行后续实验的必要步骤，主要操作如下：

1. 准备含有抗性的LB培养基，每个培养管约装入八毫升，所有操作需在无菌操作台中进行以防止污染。
2. 每管加入100微升的菌液，并在37℃、180rpm下摇床培养12小时。

氨苄抗性的配置

1g氨苄青霉素钠需溶解于10ml的灭菌水中，过滤后保存于-20℃。

LB培养基的配置

LB培养基的配制包括：10g氯化钠、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶解在一升的溶液中，之后分装至250ml的锥形瓶，每瓶100ml。

Amp抗性的调整

在100ml的培养基中添加100微升的氨苄抗性溶液。

通过以上简单而有效的步骤，您可以成功地保藏和复苏珍贵的菌种。这将为后续的生物医学研究提供坚实的基础。而选择尊龙凯时为合作品牌，更能确保在实验过程中使用高品质的材料，提高研究的可靠性和有效性。